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哺乳动物细胞和昆虫细胞该怎么安排?
文/lu、      2016/06/08

细胞密度

哺乳动物细胞:贴壁培养细胞进入对数生长期、未达到汇合状态时即应进行传代。正常细胞达到汇合状态时会停止生长(接触抑制),重新接种后需要较长时间才能恢复。转化细胞即使达到汇合状态也能继续增殖,但是在经过大约两个倍增时间后通常会变质。类似地,悬浮培养的细胞进入对数生长期、未达到会和状态时也应进行传代。达到汇合状态时,悬浮培养的细胞会聚集成团块,转动培养瓶时培养基会变得浑浊。

昆虫细胞:昆虫细胞进入对数生长期、未达到汇合状态时应进行传代。牢固贴壁的昆虫细胞达到汇合状态时也可传代,虽然此时细胞更容易从培养器上解离下来,但是如果反复将昆虫细胞在密度超过汇合的状态下传代,细胞的倍增次数会减少,活力会降低,贴壁能力也会下降。另一方面,将贴壁培养的昆虫细胞在达到汇合状态前传代需要较大的机械力,才能使细胞从单细胞层中脱离。反复在达到汇合状态前传代,会导致细胞倍增次数减少,活力降低,健康度较差。

 

 

 

培养基耗竭

哺乳动物细胞:生长培养基pH值降低,通常表示乳酸蓄积,乳酸是细胞代谢的副产物。乳酸有细胞毒性,而且pH值减低也是细胞生长的不利因素。pH值改变的速度通常取决于培养体系中的细胞浓度,细胞浓度越高,培养基耗竭的速度越快。如果发现pH值迅速降低(>0.1-0.2 pH单位),同时细胞浓度增大,则应对细胞进行传代。

昆虫细胞:用于昆虫细胞培养的生长培养基通常比哺乳动物细胞培养基酸度大。例如,用于Sf9细胞培养的TNM-FA和Grace 培养基的pH 值为6.2。与哺乳动物细胞培养过程不同,昆虫细胞生长时培养基的pH值会逐渐升高,但一般不会超过6.4。但是,与哺乳动物细胞一样,昆虫细胞达到较高密度后生长培养基的pH值也会开始降低。

 

 

 

传代时间安排

严格按照预定时间进行细胞传代可确保细胞的生物学行为稳定,便于监测其健康状态。从某一接种密度开始逐渐调整细胞接种密度,直到达到适合该细胞的稳定生长速度和产量。细胞偏离如此确定的生长模式通常表示细胞健康状况不佳(例如:变质、污染)或者培养体系的某一组分功能异常(例如:未达到最佳温度、培养基过于陈旧)。我们强烈建议您保留详细的细胞培养记录,记录加料和传代时间、所用培养基种类、解离方法、分种率、形态学观察结果、接种浓度、产量和抗生素用法。

 

最好按照传代时间安排开展实验和其他非常规操作(如更换培养基种类)。如果您的实验安排与常规传代时间安排不吻合,则应确保当细胞仍处于延滞期或者已经达到汇合状态,停止生长时,不进行传代。

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